A note on four nonradioactive labeling systems for dot hybridization detection of potato viruses

Abstract

Complementary DNA clones of genomic RNAs of potato (Solarium tuberosum) viruses S (PVS), X (PVX) and Y (PVY) were produced and tested for their capacity to hybridize with various plant virus RNAs. PVS clone S12 and PVX clone X6 were found to be very specifie to PVS and PVX RNA respectively, whereas PVY clone Y10 strongly hybridized with PVY RNA and weakly with PVS RNA. Four commercial, nonradioactive Systems of nucleic acid labeling and detection were compared to the usual ³²P-labeled probe using dot hybridization experiments. Colorimetric detection of digoxigenin-labeled DNA probes gave a level of sensitivity of 1 ng of virions (60 pg of RNA), similar to autoradiography of ³²P-labeled probes. Sulfonated, biotinylated and peroxidase-labeled probes were slightly less sensitive, allowing detection of 600 pg of viral RNA.

Résumé

Des clones d'ADN complémentaire ont été fabriqués à partir des ARN génomiques des virus S (PVS), X (PVX) et Y (PVY) de la pomme de terre (Solarium tuberosum). Les clones ont été sélectionnés pour leur spécificité par l'hybridation avec divers ARN viraux. Les clones S12 de PVS et X6 de PVX se sont avérés très spécifiques à l'ARN de PVS et PVX respectivement, alors que le clone Y10 de PVY a hybride fortement à l'ARN du PVY et faiblement à l'ARN du PVS. Quatre systèmes commerciaux non radioactifs de marquage des acides nucléiques et de détection ont été comparés entre eux et avec le marquage radioactif traditionnel de la sonde au ³²P. La détection colorimétrique de sondes d'ADN marquées à la digoxygénine permet de déceler 1 ng de virions (60 pg d'ARN), soit une sensibilité du même ordre que l'autoradiographie avec des sondes marquées au phosphore radioactif. Les sondes sulfonées, biotinylées et marquées à la peroxydase ont été moins sensibles en permettant la détection de 600 pg d'ARN viral.